文献名：Identification of salivary biomarkers for oral cancer detection with untargeted and targeted quantitative proteomics approaches
期刊名：Molecular & Cellular Proteomics
发表时间：2019年9月
IF：4.828
单位：
- 台湾桃园长庚大学医学院
- 台湾桃园林口长庚纪念医院
- 台湾台中国立中兴大学
物种：人唾液
技术：非靶向和靶向组学组学
一、 概述：
本研究选取健康个体、口腔潜在恶性疾病（OPMD）患者及口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者的唾液，使用非靶向（iTRAQ-MS）对唾液蛋白质组进行定量分析。与非癌组（OPMD组和健康组）相比，OSCC组中67种蛋白质水平升高、18种蛋白质水平降低。使用多级反应监测（MRM-MS）进一步选择候选生物标志物并用免疫测定法验证，发现补体因子H（CFH）、纤维蛋白原α链（FGA）和α-1-抗胰蛋白酶（SERPINA1）可作为OSCC诊断的潜在唾液标志物。
二、 研究背景：
口腔鳞状细胞癌（OSCC）是世界上最常见的癌症之一。在台湾，OSCC是癌症相关死亡率的第五大原因，每年导致2800人死亡。超过50%的OSCC患者首次诊断时往往是晚期的，这迫切表明需要早期发现OSCC。本文选取唾液进行蛋白质组分析，旨在发现有潜力作为OSCC早期检测和/或预后的生物标志物。
三、实验设计：
四、研究成果：
1、整个实验过程可分为三个部分：非靶向质谱分析、靶向质谱验证和基于抗体的验证（图A），每个部分选取不同数量的唾液样本，特征如下表。
2、采用iTRAQ-MS对唾液蛋白质组进行分析，三次重复，分别鉴定出1838个蛋白质（图B）和定量了1705个蛋白质（图C）。
3、OSCC唾液蛋白质组差异表达分析。与健康对照组相比，OSCC组中有335个蛋白质过表达（图A）和312个蛋白质低表达（图C）。此外，与健康对照组相比，三次重复中共有147个差异表达蛋白，包括102个过表达和45个低表达；与OPMD对照组相比，三次重复均有173个差异表达蛋白，包括89个过表达和84个低表达。
4、与非癌组（OPMD组和健康组）相比，OSCC组中67种蛋白质水平升高、18种蛋白质水平降低，表明这些蛋白有可能成为OSCC诊断的标志物。在这些蛋白中添加稳定同位素标准肽（SIS）作为内部标准肽，进一步使用LC-MRM-MS方法筛选候选生物标志物。结果在67个蛋白中，24个蛋白在70分钟的LC-MRM-MS检测中被检测出来（如下表）。
与健康对照组相比，OSCC组中有6个蛋白显著过表达（APOA1、APOA4、CFH、FGA、SERPINA1和SERPIND1）。
5、使用sandwich ELISA在100名健康个体、55名OPMD患者和77名OSCC患者中进一步验证上述6个蛋白，发现OSCC组中CFH、FGA和SERPINA1蛋白水平显著高于健康对照组和OPMD对照组（图A）。通过ROC曲线分析进一步评价这三种蛋白的生物标志物（图B）。
五、文章亮点（结论讨论）：
使用非靶向iTRAQ-MS对健康个体、OPMD患者和OSCC患者的唾液样本进行定量分析，用MRM-MS和免疫测定法验证唾液生物标志物候选物，鉴定出CFH、FGA和SERPINA1蛋白可作为口腔癌的潜在生物标志物。
阅读人：卜繁宇
原文链接：https://www.mcponline.org/content/18/9/1796.abstract
DOI: https://doi.org/10.1074/mcp.RA119.001530